熒光顯微鏡是光學(xué)顯微鏡的一種，一般被觀察物是透明的，或者內(nèi)部結(jié)構(gòu)不能很好地從顏色上進(jìn)行很好的區(qū)分，那么熒光顯微鏡是一個(gè)不錯(cuò)的選擇，能夠解決普通顯微鏡無法觀察透明物質(zhì)的問題。熒光顯微鏡其原理是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體，使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長波長的熒光，從而讓觀察者對(duì)樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。在熒光顯微鏡上，必須在標(biāo)本的照明光中，選擇出特定波長的激發(fā)光，以產(chǎn)生熒光，然后必須在激發(fā)光和熒光混合的光線中，單把熒光分離出來以供觀察。因此，在選擇特定波長中，濾光片系統(tǒng)成為極其重要的角色。熒光顯微鏡廣泛應(yīng)用于生物，醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。
熒光顯微鏡包括以下基本元件：
a.光源: 通常是氙弧燈或汞燈，但近年來也使用高功率LED
b.濾光片（入射光）: 將入射光波長縮減到只留下用于激發(fā)樣品的波長，有趣的是，其被稱為激發(fā)濾光片
c.二向分色鏡或反射鏡: 將激發(fā)光反射到樣品上，并同時(shí)只通過來自樣品的發(fā)射光，傳遞到檢測儀（如下圖）
d.濾光片（發(fā)射光）: 只能通過來自樣品的發(fā)射光波長，并阻擋所有通過激發(fā)濾光片的光線，如您所想，其被稱為發(fā)射濾光片
e.CCD照相機(jī): 發(fā)射光如果不能檢測到，則沒有任何用處；對(duì)于熒光成像來說，檢測儀通常是CCD照相機(jī)，這種照相機(jī)一般也連接到電腦屏幕，能夠?yàn)槟尸F(xiàn)圖像
二向分色鏡允許較長波長的光線通過濾光片，同時(shí)反射較短波長的光線
熒光顯微鏡分類：
熒光顯微鏡一般分為透射和落射式兩種類型：
a.透射式：激發(fā)光來自被檢物體的下方，聚光鏡為暗視野聚光鏡，使激發(fā)光不進(jìn)入物鏡，而使熒光進(jìn)入物鏡。它在低倍情況下明亮，而高倍則暗，在油浸和調(diào)中時(shí)，較難操作，尤以低倍的照明范圍難于確定，但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。
b.落射式：透射式目前幾乎被淘汰，新型的熒光顯微鏡多為落射式，光源來自被檢物體的上方，在光路中具有分光鏡，所以對(duì)透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用，不僅便于操作，而且從低倍到高倍，可以實(shí)現(xiàn)整個(gè)視場的均勻照明。
落射熒光顯微鏡的典型光路
